授课内容：菌种的制作与培养
教学目的和要求：了解培育室及用具使用、原料、菌培养液配制比、生产工艺流程、注意事项等。
重点、难点：掌握培育室及用具使用、注意事项等
教学内容：一、菌种培养基的配制
1．谷粒（麦粒、玉米粒）培养基 配方为谷粒50公斤加石膏0．5公斤。先将谷粒用清水洗净，浸泡12小时左右，使其充分吸水。谷粒泡好后放人锅内煮，以熟而不烂为度，捞出控水后，把石膏粉与谷粒拌匀。这样培养基适用于做原种培养基。
2．木屑培养基 配方为阔叶树粗木屑78％、麦麸或米糠20％。白糖l％、石膏l％。制作方法是把选用的木屑筛去木块和树皮，先将木屑、麦麸、石膏搅拌均匀，再用溶化的糖水拌料。配制好的培养基用手紧握时，手指间有水溢出而不下滴为宜（含水量约为60％）。这种培养基对原种和栽培种生产都是适宜的。
上述培养基配好后，即可进行装瓶 （500毫升装的罐头瓶或酒瓶），装入量至瓶肩。如果是木屑培养基需要培养料在瓶中达到上紧下松程度，瓶中间用锥形木棒扎一个直径约1．5厘米的洞，直通瓶底，以增加氧气，利于菌丝蔓延。瓶口内外擦净，罐头瓶用聚乙烯膜常压灭菌或聚丙烯膜封口，酒瓶可用棉塞封口。
用瓶子制种，成品率高，但瓶易碎，成本也高，大规模生产和运输有一定的困难。近年来，用塑料袋制作栽培种的菇农越来越多，具有轻便、价廉等优点。塑料袋有聚乙烯和聚丙烯两种，聚乙烯袋只能用于常压灭菌，聚丙烯袋常压、高压灭菌均可。塑料袋规格以17×30×0．005厘米较为合适。
二、菌种培养基的灭菌
培养基的灭菌是菌种生产成败的关键。未经灭菌的培养基中存在着大量的微生物，常常导致菌种污染，给生产造成损失。目前菇农普遍采用的灭菌方法是常压蒸气灭菌。
常压蒸气灭菌的常压灭菌灶用砖砌成，选直径110厘米的铁锅，用砖砌高100厘米。直径120厘米的锅筒，内外用水泥抹光滑。培养基装入灭菌锅后，用较厚的塑料膜和麻袋片把锅筒口包盖住，用绳子捆绑结实。然后用旺火猛烧，在最短的时间内将锅烧开。待塑料膜鼓气后成馒头状时，说明锅已烧开。灭菌从这时开始计时，要持续8～10小时，确保灭菌彻底。 一些菇农往往在灭菌上麻痹大意，因杂菌污染严重而导致制种失败。常压灭菌操作时要做到“三防止”，一要防止中途降温，灭菌过程中，中途不得停火，如锅内达不到100℃，在规定时间内则达不到灭菌的目的。二要防止烧干锅，在灭菌之前锅内要加足水，在灭菌过程中，如果锅内水量不足，要及时从注水口注水。三要防止存在灭菌死角，如锅底着火部位不均，锅筒上口仅从一端漏气等等都可能出现灭茵死角。
三、接种与培养
灭菌后的培养基可进行接种，接种就是将菌种移植到培养基上。从事接种的操作人员，必须树立严格的无菌观念，使操作者和接种工具处于严格的无菌状态。因此，必须对接种工具进行严格的灭菌，对操作环境进行彻底消毒，操作者的手和衣着也要消毒，严格遵守无菌操作规程。接种时要在接种箱内或接种室里进行。
接种时，先将接种箱或接种室内杂物清除干净， 用2％来苏儿喷雾消毒。将待接种的培养基。菌种和所用工具放人接种箱或接种室工作台上，用福尔马林和高锰酸钾熏蒸接种箱、接种室至少半小时，用量是每立方米空间用5克高锰酸钾，加10毫升甲醛。 接种前用75％的酒精棉擦抹双手、母种试管或原种瓶外表，然后点燃酒精灯，进行操作。接种完毕，熄灭酒精灯，将已接好种的瓶或袋移至培养室培养。一般一支母种可扩繁原种4～5瓶，一瓶原种可扩繁栽培种40～50瓶或15～20袋。
培养室要保持清洁并调好温、湿度和空气、光照等环境条件。菌种培养的适宜温度以20～25℃，空气的相对湿度控制在60％左右为宜。发菌期间要求暗光发菌，培养室要始终保持通风良好的环境条件。按此管理方法，菌种在40天左右就可长满瓶或袋。 长满瓶（袋）的菌种如果不马上使用，要放在0～10℃以下的环境中，可保藏1～3个月。
主要参考资料：姜涛、张忠伟，香菇枝条菌种的制作与应用技术，农业与技术，2007.1
